单克隆筛选是根据细胞所具有的特性将单个细胞从混合的细胞样品中分离出来的⼀种技术,是抗体制备细胞株优化、稳转细胞株构建、药物靶点筛选等应⽤中重要的⼀环,能够更好地为不同邻域科学研究和药物研发提供支持。
一、特点:
1、通用性筛选:适用于多种细胞,无需携带抗性荧光标签。
2、单列线性模式:适用于高价值细胞。
3、提供克隆性证据:可为每个克隆提供克隆形成图像。
4、温和的微流控技术:更高存活率,更低损失率。
二、单克隆筛选的方法
1、有限稀释法:克隆/亚克隆:分离单个细胞置入多孔培养板的每个孔中培养。然后,用ELISA检测培养上清来判断是否有产生目的抗体的单克隆生成。
2、检测每孔细胞是否产生针对目的抗原表达的抗体,所以筛选的条件是两层意思:单个细胞单孔培养保证每个孔中的细胞在产生抗体时是针对同一抗原的同一抗原决定簇产生的的,但每个孔中细胞却不一定都能产生抗体,把那些不产生抗体的细胞淘汰,对能分泌针对抗原某一决定簇抗体的阳性细胞选择下来继续克隆,从而保证大量的生产所需抗体。
3、对选择下来的细胞进行克隆方法有两种:一种可以在体外培养;一种可以一直到小鼠腹腔中增殖,即可从中提取所需要的单克隆抗体。
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三、实验结果:
实验结果以总细胞孔(如96孔)中出现克隆孔统计出克隆百分率,并可进一步按单细胞孔、双细胞孔、多细胞孔分别计算。
四、注意事项:
1、注意无菌操作,一旦发现污染(孔)必须及时处理;
2、计数细胞要求准确,稀释量亦要准确,否则将造成一孔多细胞克隆或克隆百分离太低;
3、在计数克隆出现率之前,不宜更换培养液,也不宜强烈振动培养板;
4、做克隆化培养的小牛血清必须是优质血清;
5、若做克隆抗体检测时,特别要保护细胞的生长状况,防止细胞生长不良甚至丢失。
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